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紫外分光光度計測BSA濃度曲線時注意事項
發(fā)布日期:2017-03-21 瀏覽次數(shù):5563
BSA即為牛血清白蛋白,在生化實驗中有廣泛的應(yīng)用。BSA濃度可根據(jù)紫外分光光度計由曲線測得,到底是怎么一回事呢?
紫外分光光度計測量蛋白濃度常可用經(jīng)典公式:
蛋白的濃度(mg/ml)=1.4280-0.74A260;
也可同時讀取一系列倍比稀釋的已知蛋白含量的標(biāo)準(zhǔn)液的光密度值,做出標(biāo)準(zhǔn)曲線,后換算出濃度。
紫外分光光度計測試需注意的是:
1.用于儀器調(diào)零的液體與待測樣品一致,標(biāo)準(zhǔn)蛋白也要使用同樣的溶液;
2.光密度值應(yīng)該在0.1-0.8之間;
3.要求蛋白質(zhì)溶液*透明;
4.對含量很低的蛋白質(zhì)溶液可使用215/225nm的波長測定;
5.使用蛋白質(zhì)濃度范圍為0.1-1.0mg/ml。
配制濃度約為10mg/ml的BSA溶液,然后按一定倍數(shù)稀釋,至低濃度為0.017mg/ml,用紫外分光光度計測試這一系列的BSA溶液的吸光度,做出標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)測量結(jié)果而知,用紫外分光光度計測試牛血清白蛋白(BSA)的濃度,濃度太高曲線將逐漸平緩,而在0.02-2.0mg/ml濃度之間,基本能呈現(xiàn)出較好的線性。
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